Polymérase chaîne réaction et électrophorèse

La PCR consiste à amplifier une portion d’un segment d’ADN choisie avec des amorces spécifiques par la complémentarité des bases, afin d’étudier ses caractéristiques. Cela se déroule en trois étapes :

1. Dénaturation
2. Hybridation
3. Elongation

L’ADN (Acide DésoxiriboNucléïque) est le support de l’information génétique de tous être vivant. A l’heure actuelle on le représente comme une hélice, composé de deux brins distincts. Chaque brins se forment par un enchaînement de 4 nucléotides constitués d’un désoxyribose, d’un phosphore et d’une base purique (A, G) ou pyrimidique (T, C) (adénine, thymine, cytosine, guanine) complémentaires deux à deux : A, T et C, G.

 Pour lire des PCR, on utilise un gel d’agarose : électrophorèse.

  

L’électrophorèse permet la séparation de fragments d’ADN  dont la taille varie de quelques centaines de nucléotides à 50 kilo-bases par le passage d’un courant électrique

 

 Pour cela on utilise une solution électrolyte (TBE) afin de faciliter le passage du courant.

La lecture, consiste à exposer aux UV le gel qui, grâce à la présence de BET (bromure d’éthidium) inclut dans le gel lors de sa préparation qui va s’intercaler entre les nucléotides, va émettre une fluorescence. Cette fluorescence sera retransmise sur un écran.

Pour faire migrer tous un génome, le champ pulsé (cuve électrophorèse plus perfectionné) va utiliser un courant alternatif, et modifier son orientation, dans notre cas l’angle entre les deux champs électrique est de 120°  afin d’aider le génome à migrer dans le gel d’agarose.

comme représenté sur l'image ci-dessous:

Ces techniques sont de plus en plus utilisées pour la classification des bactéries et autres micro-organismes.